行业动态

     循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）的概念最早由澳大利亚籍医生Ashworth于1869年首次提出，发现在已死亡的转移性肿瘤患者血液中存在肿瘤细胞。目前循环肿瘤细胞的研究表明CTC是源于原发肿瘤或转移肿瘤，获得脱离基底膜的能力并入侵进入血管的肿瘤细胞的统称，可在肿瘤转移灶形成之前以不同形态存在于外周血中，在恶性肿瘤的转移中起了关键的中介作用。因此通过CTC检测捕捉外周血中的CTC，监测CTC类型和数量变化的趋势等，可在乳腺癌、肺癌、结直肠癌及前列腺癌等转移性实体瘤的微转移、术后复发监测、疗效评估与预后及个体化靶向治疗等方面发挥重要作用。

       一些研究表明：1 g肿瘤组织，大约有100万个肿瘤细胞，可每日播散肿瘤细胞进入血液。然而CTC的数量在循环血液中常呈现出动态递减的特点，到达外周血时已十分稀少。正常人1mL血液里大概有1亿血红细胞，100万左右白细胞。然而在一毫升癌症病人血液里，往往只能分离到几个到几十个CTC 。因此，CTC的检测技术一直是一个十分有挑战的难题。

       目前，CTC的检测首先需要进行CTC的分离和富集，然后对这些分离的细胞进行蛋白水平或者基因水平的分析鉴定。下文我们将介绍目前常见的分离富集技术^[1]。

抗体依赖性分离技术

一、磁微粒吸附（阳性捕获法）：

      利用特异性抗体与磁珠结合以吸附CTC。

     优点：获取的CTC纯度高。

     缺点：CTC分为上皮细胞表型、间质细胞表型和上皮间质细胞混合表型，依赖CTC的抗体表达，无法获取全部特征的CTC，易漏检。

二、微流控 ：

     在微流控芯片上包被特异性抗体吸附CTC。

     优点：获取的CTC纯度高，检测自动化程度高。

     缺点：依赖CTC的抗体表达，无法获取全部特征的CTC，易漏检；处理样本量有限。

抗体非依赖性分离技术

一、惯性分离/过滤法：

      根据肿瘤细胞的体积大于白细胞体积，分离尺寸较大的细胞。

      优点：不依赖CTC的抗体表达，富集时间短，成本低。

      缺点：丢失尺寸小的肿瘤细胞，对样本要求高，储存时间超4小时的样本可能无法处理。

二、密度梯度分离法：

      根据肿瘤细胞与白细胞密度不同，通过梯度离心分离CTC。

      优点：不依赖CTC的抗体表达，无需专用设备，使用场景灵活。

      缺点：丢失迁移的CTC和CTC微栓子，操作流程复杂，时间长。

三、免疫磁珠去除白细胞法（阴性富集法）：

      利用CD45磁珠抗体吸附白细胞，在磁场作用下去除白细胞，CTC被富集沉淀。

      优点：不依赖于CTC的抗体表达，可收集全部亚型的CTC；易于自动化。

      缺点：获取的CTC纯度低。

四、密度梯度分离法与免疫磁珠去除白细胞法结合双保险技术（普方德）：

      先采用密度梯度离心法把白细胞和CTC都富集在白膜层，再用免疫磁珠去除白膜层中的大部分白细胞以获取CTC。

      优点：不依赖于CTC的抗体表达，可收集全部亚型的CTC，不易发生漏检；可进行细胞和分子分析等下游研究；高度自动化，操作简单。